Changes in Als2 Expression Leads to Different Outcomes on the Expression of Two NF-kB Targeted Genes in N2a and C2C12 Cell LinesMehmet Ozansoy1, Muzaffer Beyza Ozansoy21T.C. Istanbul Medipol University, International School of Medicine, Dept. of Physiology, Istanbul, Turkey
2T.C. Istanbul Medipol University, School of Medicine, Dept. of Physiology, Istanbul, Turkey
Aim: Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS) is a neurodegenerative disorder affecting spinal and cortical motor neurons. Motor neuron degeneration leads to progressive muscular atrophy. Als2 (alsin) is one of the causative genes of ALS and UXT gene is an interacting partner of Als2. Since UXT is a known cofactor in NF-κB enhancesome, we aimed here to compare the effects of Als2 silencing on NF-κB activity by using N2a and C2C12 cell lines.
Methods: Mouse neuroblastoma and myoblast cell lines (N2a and C2C12) were used. Als2 was silenced by RNAi and UXT, A20 and IL8 expressions were measured by qRT-PCR. Data were statistically evaluated by Student t-test.
Results: In N2a cells, 73.4% Als2 transcript decrease was observed, whereas in the C2C12 cells 73.7% decrease was found. UXT expression in Als2-silenced N2a cells was found to be decreased by 40%, while in Als2-silenced C2C12 it increased 9-fold. IL8 expression was found to be decreased by 84% in N2a cells, on the other hand, in C2C12 cells it increased approximately by 50-folds. A20 expression was found to be upregulated by only 65% in N2a cells, whereas it was drastically increased (10-folds) in C2C12 cells.
Conclusion: In these cell lines, responses to Als2 knock-down in terms of UXT gene expression were different. These responses were followed by investigating the expression levels of IL8, and A20. Our findings show that not only the Als2 protein interacts with UXT, but the Als2 gene expression affects the UXT gene expression both in N2a cells and C2C12 myoblasts. Keywords: ALS, Als2, NF-kB, N2a, C2C12
Als 2 Ekspresyonunun NF-kB Hedefli İki Gen Üzerindeki Olası Etkisinin N2a ve C2C12 Hücre Hatlarında AraştırılmasıMehmet Ozansoy1, Muzaffer Beyza Ozansoy21T.C. İstanbul Medipol Üniversitesi, Uluslararası Tıp Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, İstanbul, Türkiye
2T.C. İstanbul Medipol Üniversitesi, Tıp Fakültesi, Fizyoloji Anabilim Dalı, İstanbul, Türkiye
Amaç: Amiyotrofik Lateral Skleroz (ALS) spinal ve kortikal motor nöronları etkileyen nörodejeneratif bir hastalıktır. Motor nöron dejenerasyonu ise kaslarda ilerleyici atrofiye sebep olur. ALS’ye neden olan genlerden biri Als2 (alsin) genidir ve UXT geni de Als2 ile etkileşimde olan genleden biridir. UXT proteininin NF-κB kompleksinde kofaktör olarak rol aldığı da bilinmektedir. Bu çalışmadaki amacımız Als2’nin susturulmasının NF-κB aktivitesindeki olası etkilerini N2a ve C2C12 hücre hatlarında karşılaştırmaktır.
Yöntem: Bu çalışmada fare nöroblastoma hücreleri (N2a) ile fare miyoblast hücreleri (C2C12) kullanıldı. Söz konusu hücrelerde Als2 geni RNAi ile susturuldu ve UXT, IL8 ve A20 genlerinin ekspresyonları qRT-PCR ile ölçüldü. Veriler Student t-tes kullanılarak istatistiksel olarak değerlendirildi.
Bulgular: N2a hücrelerinde Als2 ekspresyonundaki azalış %73,4 olurken C2C12 hücrelerinde %73,7’lik bir düşüş gözlendi. Als2 geni susturulmuş N2a hücrelerinde UXT seviyesi %40 azalırken, C2C12 hücrelerinde 9 katlık bir UXT artışı saptandı. IL8 ekspresyonu N2a hücrelerinde %84’lük bir düşüş gösterdi, ancak C2C12 hücrelerinde IL8 ekspresyonu 50 katlık bir yükseliş kaydetti. Öte yandan A20 ekspresyonu N2a hücre hattında %65 artarken, bu artış C2C12 hücre hattında 10 misli olarak gerçekleşti.
Sonuç: Als2 geninin susturulmasının UXT üzerinden NF-κB yolağına olan etkilerinin farklı olduğu sonucuna ulaşılmıştır. Bu sonuca IL8 ve A20 genlerinin ekspresyonlarındaki değişimlerin her iki hücre hattında da farklılık göstermesi üzerinden varılmıştır. Ayrıca Als2 ve UXT arasındaki bağlantı her iki hücre hattında da tekrar gösterilmiş ve Als2’nin susturulmasının nöronal hücreler ile kas hücreleri açısından farklı sonuçlar doğurabileceği de anlaşılmıştır. Anahtar Kelimeler: ALS, Als2, NF-kB, N2a, C2C12
Mehmet Ozansoy, Muzaffer Beyza Ozansoy. Changes in Als2 Expression Leads to Different Outcomes on the Expression of Two NF-kB Targeted Genes in N2a and C2C12 Cell Lines. Medeniyet Med J. 2019; 34(2): 123-129
Corresponding Author: Mehmet Ozansoy, Türkiye |
|